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RNA转染试剂转染效率的对比

作者:科研助手 阅读:5839次 时间:2017-06-28 18:57:51

近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:

实验方法

转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen Biosystem Co,Ltd)

待处理细胞:human CD8+T 细胞

1.针对Turbofect转染的方法

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀;

取0.2μL Turbofect transfection reagent和agomir稀释液充分混合。

转染复合物制备完成; 混匀后室温下孵育15-20分钟,直接取10μL加入已铺好细胞的孔中,继续培养24h收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制: 100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+0.5+23.25

2.EntransterTM-R4000转染

每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。

取0.5μLagomir,加入9.5μL无血清RPMI1640,充分混匀,制成10μLagomir稀释液;

取0.25μL EntransterTM-R4000,然后加入9.75μL无血清稀释液体,充分混匀,制成10μLEntransterTM-R4000稀释液;

将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合(可用振荡器或加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。

转染复合物制备完成;

将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中,前后移动培养皿,混合均匀;

转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24 h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

转染Mix的配制:100nMago/N.C.:(0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640)×2.5=1.25+23.75;Etranster稀释液:(0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640)×5=1.25+48.75(室温静置5分钟),取20μL至ago和N.C.管中,室温静置15分钟。

实验结果

图片.png

结论:从目的miRNA表达水平的检测结果来看,转染24 h后,英格恩生物公司(EngreenBiosystem)的EntransterTM-R4000 (ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂 (ago/NC: 285870倍)。

讨论:从实验结果来看,英格恩生物公司(Engreen Biosystem)的EntranstenTM-R4000(ago/NC: 422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂 (ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物(EngreenBiosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系,包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。

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