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成功转染siRNA细胞铺板密度为什么很重要?

作者:科研助手 阅读:5545次 时间:2017-07-04 10:28:35

英格恩生物RNA转染试剂成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样,DNA的转染是过量表达,死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大,但siRNA的转染,死亡的细胞所有的基因表达(包括特定目标基因)都下降,将与siRNA造成的特定目标基因的表达下降现象是一致的,将大大影响实验结果。选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要。 
    由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-pcr检测,转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。


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