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神经元原代细胞培养步骤

作者:科研助手 阅读:5287次 时间:2017-07-04 11:04:59

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤:
1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑;
2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块;
3、  移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,37℃培养箱中消化30min;
4、  将皮层组织碎块移入离心管,弃去剩余消化液,用接种液洗3次,每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底,弃去上清液;
5、  最后再用接种液1ml混悬,反复吹打(巴氏吸管)混悬液中组织块,力度适中,至浑浊后将上清液移入培养瓶待用;
6、  加入1ml接种液后再次吹打,如此反复3-4次,组织块逐渐消化后,弃去最终残块;
7、  收集含单细胞悬液的上清液约4-5ml于培养瓶中,以接种液重新悬浮细胞,细胞记数;接种1x107个细胞于6孔培养板中;
8、  培养24h至细胞贴壁后,换全培养液(DMEM/F12+2%B27,engreen)培养3d,观察神经元生长状况;
9、  换用阿糖胞苷培养液(终浓度2.5ug/ml,换半液)培养3d以抑制神经胶质细胞及杂细胞生长,获得单纯培养的原代神经细胞;
10、  每隔3d换全培养液1次,每次换半液。

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