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有效增强慢病毒感染效率

作者:科研助手 阅读:7056次 时间:2017-07-07 10:40:28

产品介绍

英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co,Ltd.是专业的转染试剂研发生产厂商。EnvirusTM-LV是英格恩生物公司研发合成的针对慢病毒 感染的增强剂,该试剂采用纳米技术合成。EnvirusTM-LV通过物理作用将病毒富集在细胞表面以增强感染效率。由于纳米技术的应用,EnvirusTM-LV在大幅度提高慢病毒感染效率的同时,细胞毒性非常小,并且不干扰细胞生理功能。

重要提示

1.采用EnvirusTM-LV增强后,感染时的细胞融合度对感染效果有影响,建议细胞融合度在50%左右时进行感染实验(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)

2.确定了细胞量以后,建议采用倍比稀释的方法,用不同量的慢病毒(MOI值:1100pfu/cell)进行实验以确定最佳的慢病毒用量。

3. EnvirusTM-LV和病毒的稀释液采用和细胞基础培养基一致的无血清液体,如无血清DMEM1640

4. EnvirusTM-LV和感染效率的关系,在其他条件固定的情况下,增强剂用量越大,感染效率越高,一般增强剂的用量可以用到推荐用量的1-3倍。但增强剂用量过大,可能导致细胞毒性。

实验过程(以24孔板为例)

1.提前一天细胞铺板

提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)

2.感染

⑴将2ulEnvirusTM-LV25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5分钟。

注:感染悬浮细胞,建议增大EnvirusTM-LV到推荐用量的1-3倍,这样感染效果更好

⑵将适量病毒原液或稀释液与EnvirusTM-LV稀释液轻柔混匀,4℃静置15分钟。

注:如采用病毒原液直接混合出现沉淀,建议用与⑴等量同样的无血清稀释液稀释病毒。

⑶将上述混合液加入到含完全培养基的细胞上,37℃培养8小时后观察细胞状态,如没有明显变化,不要更换培养基,继续培养24小时后常规更换培养基。由于慢病毒感染较慢,一般在感染96小时后观察结果。

注:适当减少感染时的细胞培养基量可以增加感染效率,但也可能增加细胞毒性。如出现细胞毒性可增加培养基量或更换培养基。

1 不同细胞培养容器推荐用量

细胞培养容器

表面积(cm2)

表面积相对于24-well比率

每孔EnvirusTM-LV用量

EnvirusTM-LV稀释液体积

每孔培养基总量

96-well

0.3

0.2

0.5μl

10μl

100μl

48-well

0.7

0.4

0.8μl

15μl

200μl

24-well

1.9

1

2μl

25μl

500μl

12-well

3.8

2

4μl

25μl

1ml

6-well/35-mm

10

5

10μl

50μl

2ml

60 mm/T25 flask

21

10

20μl

125μl

5ml

100 mm/T75 flask

58

30

60μl

250μl

15ml


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