生物谷

  • 推荐有效增强慢病毒感染效率

    一 产品介绍 英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co,Ltd.)是专业的转染试剂研发生产厂商。EnvirusTM-LV是英格恩生物公司研发合成的针对慢病毒 感染的增强剂,该试剂采用纳米技术合成。EnvirusTM-LV通过物理作用将病毒富集在细胞表面以增强感染效率。由于纳米技术的应用,EnvirusTM-LV在大幅度提高慢病毒感染效率的同时,细胞毒性非常小,并且不干扰细胞生理功能[更多]

    2017-07-07 10:40:28 阅读(7057) 评论
  • 推荐western-blot中ECL发光检测实验步骤

    ECL Western特异发光检测试剂盒用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。下面以engreen的超敏型ECL发光液Enlight-Plus为例,说一下检测实验步骤。 1. 常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。 注意:Enlight-Plus 推荐的抗体稀释度为: 储存液浓度为1mg/ml 的一抗推荐稀释度 储存液浓度为1m[更多]

    2017-07-07 10:39:43 阅读(5564) 评论
  • 推荐神经元原代细胞培养步骤

    小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤: 1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑; 2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块; 3、  移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,37℃培养箱中消化30min; 4、  将皮层组织碎块移入离心[更多]

    2017-07-04 11:04:59 阅读(5784) 评论
  • 推荐成功转染siRNA细胞铺板密度为什么很重要?

    英格恩生物RNA转染试剂成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样,DNA的转染是过量表达,死亡一些细胞[更多]

    2017-07-04 10:28:35 阅读(5546) 评论
  • 推荐悬浮细胞的siRNA转染过程

    悬浮细胞的siRNA转染操作步骤,以24孔板siRNA转染为例,转染试剂为EntransterTM-R4000。1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终[更多]

    2017-07-03 13:49:45 阅读(5141) 评论
  • 推荐RNA专用转染试剂,高效转染

    EntransterTM-R4000 (用于将RNA转染入动物细胞) 使用手册 一 产品介绍 本品推荐用于将siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor等小片断RNA转染入动物细胞(包括各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞、昆虫细胞等)。 本品在多种细胞系的验证中均表现了很好的RNA转染效率,并有很低的细胞毒性,而较低的细胞毒性对RNAi实验尤其重要。 二 重要提示 1.由[更多]

    2017-07-03 13:49:25 阅读(5080) 评论
  • 推荐Entranster-DNA转染试剂,高效低毒,超越脂质体

       本品推荐用于常规细胞的转染。 一 重要提示 1.本品在转染过程中可以添加抗生素,抗生素的添加与否不影响转染效率和毒性。 2.如转染后需要用Trizol提取RNA,建议转染后6小时换液。 二 实验过程(以24孔板为例) 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。 2.转染过程 ⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充[更多]

    2017-07-03 13:48:52 阅读(2332) 评论
  • 推荐流式细胞周期检测操作步骤

    1. 细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。2. 细胞固定:800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。3. 细胞染色:1500rpm离心5min,弃上清,以3mL的PBS洗涤一次,加入400uL溴[更多]

    2017-06-29 16:13:12 阅读(2192) 评论
  • 推荐如何避免western-blot化学发光(ECL)出现高背景?

    做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。    影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分[更多]

    2017-06-29 16:13:03 阅读(2124) 评论
  • 推荐如何避免western-blot化学发光出现淬灭?

    做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生,经常有朋友反映,加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光,可亮光很快就消逝了,压完片后,条带却很弱,甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么?    要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产[更多]

    2017-06-29 16:12:55 阅读(2160) 评论
  • 推荐B27细胞培养添加剂使用手册

    英格恩B27细胞培养添加剂(B27 Supplement)是英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co,Ltd.)根据相关细胞培养特点最新优化研发的无血清细胞培养添加剂。 英格恩的B27添加剂在保持通常配方的基础上优化了各组分的配比和生产工艺使相关活性成分的活性保持得更好,同时细胞的培养效果更好。1.介绍    B27细胞培养添加剂无血清细胞培[更多]

    2017-06-29 16:12:46 阅读(2242) 评论
  • 推荐N2细胞培养添加剂使用手册

    N2细胞培养添加剂是英格恩生物(engreen)最新优化研发的无血清细胞培养添加剂。 在保持通常配方的基础上优化了各组分的配比和生产工艺,使相关活性成分的活性保持得更好。1.产品介绍       N2细胞培养添加剂是最新优化研发的无血清细胞培养添加剂。 在保持通常配方的基础上优化了各组分的配比和生产工艺,使相关活性成分的活性保持得更好。同[更多]

    2017-06-29 16:12:37 阅读(5220) 评论
  • 推荐动物体内转染之局部注射方法

    EntransterTM-in vivo体内转染试剂                              [更多]

    2017-06-29 16:12:25 阅读(5089) 评论
  • 推荐siRNA细胞转染实验操作步骤

    下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染[更多]

    2017-06-29 16:12:12 阅读(5085) 评论
  • 推荐DNA细胞转染操作步骤

    下面以Entranster-H4000,DNA转染试剂为例,简要说明DNA细胞转染实验步骤1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。 2.转染过程 ⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。 注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 ⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25[更多]

    2017-06-29 16:12:03 阅读(5060) 评论
  • 推荐western-blot实验步骤

    Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) 使用细胞裂解液,对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 [更多]

    2017-06-29 16:11:55 阅读(5108) 评论
  • 推荐细胞转染为什么不能加血清?

    传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性,导致转染效率降低,故不能有血清转染。这些转染试剂[更多]

    2017-06-29 16:11:44 阅读(5068) 评论
  • 推荐细胞增殖毒性检测(CCK8)实验步骤

    CCK8试剂盒,是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例,简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤方法/步骤在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃,5% CO2 的条件下)。向培[更多]

    2017-06-29 16:11:32 阅读(5104) 评论
  • 推荐细胞周期与细胞凋亡分析

    CCAA试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是基于PI 染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒。 下面以engreen的CCAA试剂盒为例,说明一下检测方法。 1.收集并调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞悬液进行后续操作。 1)贴壁细胞:小心吸除细胞培养液,用胰酶消化细胞,制备单细胞悬[更多]

    2017-06-29 16:11:19 阅读(5086) 评论
  • 推荐siRNA转染与DNA转染有什么不同?

    首先siRNA由于只有二十几个碱基对,相比DNA几千上万对碱基,小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA,而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。    其次,siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于过量表达的DN[更多]

    2017-06-28 19:01:33 阅读(5065) 评论
  • 推荐体内转染之小鼠尾静脉注射技巧

    1.小鼠的固定最好使用小鼠固定器,前部有气孔保证小鼠呼吸,后部可以将尾部拉出,不要让小鼠在固定器中有太多活动空间, 如空间较大,可加入一些填充物,防止小鼠在注射时乱动。2.尾静脉的准备可以将小鼠尾部在50℃左右温水浸浴2分钟,以扩张静脉。3.尾静脉的选择小鼠尾部有3条尾静脉。背部1天,两侧各1条。由于背部静脉较深,较细,一般选择侧面的2条。4.注射器的选择选择1-2ml注射器,针头采用4号或4.5[更多]

    2017-06-28 18:58:18 阅读(5132) 评论
  • 推荐RNA转染试剂转染效率的对比

    近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:实验方法转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen Biosystem Co[更多]

    2017-06-28 18:57:51 阅读(6332) 评论
  • 推荐影响细胞转染效率的因素

    1.细胞密度   一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。   2.细胞状态   这点非常关键,很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此,为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性,应尽量使用适度传代的细胞系,并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。   还有,尽量选择无支原体污染的细胞,支原体污染是肉眼看[更多]

    2017-06-28 18:57:29 阅读(5141) 评论
  • 推荐如何避免磷酸钙细胞转染的不稳定性?

    磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种试剂都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离最优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使最熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下[更多]

    2017-06-28 09:34:21 阅读(5036) 评论
  • 推荐如何克服脂质体细胞转染试剂的毒性大问题?

    已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):150[更多]

    2017-06-28 09:34:10 阅读(5135) 评论
  • 推荐western-blot实验常见问题及解决对策

    常见问题解决对策 两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平玻璃没有洗干净,应该洗得很干净过硫酸铵和TEMED加量相对较多加完试剂后应摇匀             总是漏胶避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损将两块玻璃板摆放对齐,底部处于同一平面膜上有明显气泡操作时将气泡完全排除靠膜一侧的滤纸应[更多]

    2017-06-28 09:33:49 阅读(5066) 评论
  • 推荐western-blot实验注意事项

    · 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。· 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。· 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。· 滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新的。· 转移时间一般为1.5 小时,( [更多]

    2017-06-28 09:33:36 阅读(5094) 评论
  • 推荐siRNA细胞转染实验注意事项

    为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点:1.纯化siRNAsiRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。2.避免RNA酶污染微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普[更多]

    2017-06-28 09:33:20 阅读(5095) 评论
  • 推荐电转染过程中的影响因素

    一 电转染的简介电穿孔转染,作为物理方法的一种,不仅能将DNA、RNA,还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。它是一种高效。简便的基因转移系统,具有其他转移方法无法比拟的优越性,如操作简便、快捷,可重复性强,转染率高,适用广谱等,尤其对目前一般认为难转的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。二 电转原理电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后,在细胞膜上暂时形成小孔或[更多]

    2017-06-28 09:33:00 阅读(5140) 评论
  • 推荐体内转染mirRNA与脑中风研究

    MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA,miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明,let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。Let-7c-5p,是Let-7c家族成员,是一个高[更多]

    2017-06-28 09:32:38 阅读(6455) 评论
  • 推荐英格恩生物动物体内转染试剂和您一起探究靶向LunX抑制肺癌的生长及转移

         肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤,并已成为绝大多数国家癌症死亡的主要原因。最新统计表明每年有超过一万名的患者因肺癌死亡,其中以非小细胞肺癌(NSCLC)最常见,大部分NSCLC患者在就诊时已经出现远处转移病灶。在很长的一段时间里,对晚期或转移性非小细胞肺癌患者除了进行最佳支持治疗外,就只能进行“含铂类药物的化疗”的治疗方法,与最佳支持治疗相比,虽然[更多]

    2017-06-13 18:01:39 阅读(5277) 评论
  • 推荐英格恩生物ECL发光液Enlight助力南开大学 揭示癌症信号调控机制

       Hippo信号通路是一条细胞抑制生长性信号通路,在进化过程中非常保守,多细胞动物果蝇、小鼠、哺乳动物中都存在Hippo信号通路。近年来关于Hippo信号传导通路的研究十分活跃,处于国际科技发展的前沿。            Hippo信号通路是一条细胞抑制生长性[更多]

    2017-06-13 17:59:53 阅读(5332) 评论
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